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青枯雷尔氏菌龙胆酸1,2-双加氧酶基因的克隆、表达和酶性质的研究
- 刘冬,朱顺妮,倪晋仁
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2007, 43(6):
828-833.
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摘要
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计量指标
本研究克隆、表达了青枯雷尔氏菌GMI1000菌株中编码龙胆酸1,2-双加氧酶的基因, 并通过亲和层析对该酶进行了纯化, SDS-PAGE结果表明该酶亚基约为38 kDa。该酶的最适反应温度和最适pH分别为30 ℃和7.5。该酶的Km为56μmol/L,pI为4.6~4.8。纯化后的龙胆酸1,2-双加氧高度不稳定:4 ℃下放置72 h即失去85%的酶活。 甘油和β-巯基乙醇可稳定该酶酶活,在添加10%(体积比)甘油至酶液(50 mmol/L, pH 7.3的磷酸盐缓冲液保存)后,-20 ℃保藏2周后均能检出明显的酶活。0.1~1 mmol/L Fe2+可以激活或者稳定该酶的酶活。Na+,K+,Mg2+和Ca2+(分别为1~2 mmol/L)对该酶的酶活无明显的影响。Mn2+,Zn2+和Fe3+的添加量超过2 mmol/L时,酶活急剧下降。1 mmol/L的Cu2+即使该酶失去酶活。